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    乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)法


     

                                        乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)法

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       推薦使用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)。

      體細(xì)胞計(jì)數(shù)法有直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。直接計(jì)數(shù)法中簡便易行的方法是直接用顯微鏡進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)(SCC),間接計(jì)數(shù)法就是后面提到的CMT。法。

      l主要試劑和材料

      美藍(lán)染色液:美藍(lán)乙醇飽和溶液30mL.(美藍(lán)2g95%乙醇100mL),10%氫氧化鈉溶液0.1mL,蒸餾水100mL,將上列溶液混合搖勻,過濾后備用。二甲苯、95%乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器(或移液槍)等。

      2操作方法

      2.1涂片制備

      涂布:充分搖勻新鮮乳樣,用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL,或用接種環(huán)蘸取等量的乳汁,將乳樣滴于玻片一端中側(cè),仔細(xì)涂布成約lcm2。面積的乳膜(為便于操作,可在玻片下墊襯一張硬紙板,紙板上用毛筆劃數(shù)個面積為lcm2的方格透視)。

      干燥、脫脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥,然后用二甲苯脫脂5min,再置95%乙醇中固定510min。

      染色:玻片干燥后,用美藍(lán)染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脫色數(shù)分鐘,水洗干燥后鏡檢。

      鏡檢及計(jì)數(shù):在生物顯微鏡油鏡下觀察(*好用l0×目鏡,其視野直徑要求為0.016),計(jì)數(shù)100個視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù),然后用下式計(jì)算:SCC=100xNЛr2

      視野面積Лr2=3.1416×0.01622。=0.0002cm2,

      顯微鏡系數(shù)N=I0.0002×100=500,000

      SCC=系數(shù)×每個視野的細(xì)胞平均數(shù)(即細(xì)胞總數(shù)÷100):細(xì)胞數(shù)/mL乳。

      3判定標(biāo)準(zhǔn)

      隨著國際和國內(nèi)乳品行業(yè)的接軌,國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)也在提高,一般以每毫升牛奶中含20萬個細(xì)胞為亞臨床**炎的臨界值(+);超過該值為陽性,低于該值則正常。

     

     

     

     

     

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